Los apt\u00e1meros son \u00e1cidos nucleicos de cadena sencilla (RNA o ssDNA) que, gracias a su estructura tridimensional en soluci\u00f3n, pueden unirse a un amplio rango de dianas (desde mol\u00e9culas peque\u00f1as hasta c\u00e9lulas y tejidos) con alta afinidad y especificidad. Se obtienen mediante selecci\u00f3n in vitro utilizando un procedimiento llamado SELEX y constituyen herramientas moleculares prometedoras en biotecnolog\u00eda y biomedicina (por ejemplo, para el diagn\u00f3stico y terapia de enfermedades infecciosas). El virus de la hepatitis C (VHC) causa hepatitis cr\u00f3nica, que puede progresar hacia fibrosis, cirrosis e incluso carcinoma hepatocelular. Los tests de diagn\u00f3stico actuales se basan principalmente en ensayos serol\u00f3gicos que detectan anticuerpos anti-VHC producidos por los pacientes infectados, as\u00ed como en ensayos moleculares que cuantifican el RNA gen\u00f3mico viral en plasma o suero. Sin embargo, se requieren herramientas anal\u00edticas m\u00e1s r\u00e1pidas, baratas y sensibles para el diagn\u00f3stico y terapia. La prote\u00edna core del VHC es una diana de gran inter\u00e9s: es la prote\u00edna m\u00e1s conservada del virus, es la primera que se sintetiza durante la traducci\u00f3n del genoma viral y ejerce funciones importantes en el ciclo de vida del virus, entre ellas la encapsidaci\u00f3n y protecci\u00f3n de su genoma. En esta Tesis se han seleccionado in vitro apt\u00e1meros de ssDNA y RNA frente a diferentes variantes de la prote\u00edna core del VHC que pertenecen a los genotipos 1 a 4. Tras realizar de 9 a 14 rondas de SELEX, los apt\u00e1meros individuales presentes en las poblaciones enriquecidas fueron analizados por secuenciaci\u00f3n Sanger y secuenciaci\u00f3n masiva (UDS), y las constantes de afinidad (Kd) fueron cuantificadas mediante ELONA colorim\u00e9trico y ELONA-qPCR (para apt\u00e1meros de DNA) o ELONA-RTqPCR (para apt\u00e1meros de RNA). El an\u00e1lisis bioinform\u00e1tico mostr\u00f3 que el apt\u00e1mero de DNA AptD-1312 estaba altamente representado en todos los procesos de selecci\u00f3n y su secuencia compart\u00eda motivos de secuencia con otras que hab\u00edan sido seleccionadas solamente frente a algunas variantes de la prote\u00edna core del VHC. Adem\u00e1s, tanto AptD-1312 como AptD-1932 presentaron la mayor afinidad (con Kds en el rango nanomolar bajo) y especificidad por la prote\u00edna core del VHC. El apt\u00e1mero AptD-1312 se utiliz\u00f3 como sonda de bio-reconocimiento en un aptasensor basado en grafeno que detecta la prote\u00edna core de VHC en plasma en el rango attomolar, convirti\u00e9ndose en un biosensor ultrasensible de gran utilidad para el diagn\u00f3stico cl\u00ednico. Adem\u00e1s, los dos apt\u00e1meros de mayor prevalencia y alta afinidad (AptD-1312 y AptD-1932) fueron analizados en cultivo celular humano infectado con VHC, produciendo una inhibici\u00f3n de la producci\u00f3n de progenie viral, un descenso de los niveles de RNA extracelular y una acumulaci\u00f3n del RNA viral intracelular. Tales resultados revelan su capacidad para unirse a la prote\u00edna core e inhibir el ensamblaje de la c\u00e1psida del VHC en cultivo celular, impidiendo as\u00ed la formaci\u00f3n y liberaci\u00f3n de viriones infecciosos. Esto sugiere una futura aplicaci\u00f3n cl\u00ednica como f\u00e1rmacos antivirales, complementarios o alternativos los utilizados actualmente en el tratamiento de la hepatitis C. <\/p>\n","protected":false},"featured_media":0,"parent":0,"template":"","meta":[],"departamento_global":[493],"tesis_anos":[606],"acf":[],"yoast_head":"\n